高壓滅菌器滅菌效果驗證

微生物實(shí)驗室最少不了的實(shí)驗儀器之一就是滅菌器，一般實(shí)驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器。規程要求實(shí)驗設備應定期進(jìn)行檢查和/或檢定（加貼標志）、維護和保養，以確保工作性能和操作安全。您的滅菌器有沒(méi)有做過(guò)類(lèi)似的校準或驗證呢？具體方法是怎樣的呢？下面就一起來(lái)看看高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關(guān)內容吧。

高壓滅菌器滅菌效果驗證一般有化學(xué)指示劑法、留點(diǎn)溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過(guò)驗證滅菌時(shí)滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據自己實(shí)驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進(jìn)行驗證。

一、化學(xué)指示劑法原理：

化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時(shí)間下，會(huì )受熱變色或變形，根據這一特點(diǎn)來(lái)判斷是否達到需要的滅菌參數。一般實(shí)驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來(lái)判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長(cháng)度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續20min或130℃持續4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線(xiàn)條會(huì )變黑，成為黑色線(xiàn)條；如變色不均勻，可認為該包裹不符合滅菌條件。

二、留點(diǎn)溫度計法原理：

留點(diǎn)溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過(guò)程中達到的最高溫度。驗證時(shí)把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時(shí)把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時(shí)間是否達到要求，因此是滅菌器驗證比較低的標準。

三、自制測溫管法原理：

利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內，滅菌時(shí)放在滅菌器里，滅菌完后觀(guān)察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點(diǎn)為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時(shí)把固體苯甲酸密封在小玻璃管內放進(jìn)滅菌器，滅菌結束就可以觀(guān)察苯甲酸的狀態(tài)來(lái)驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點(diǎn)溫度計法相同，也只能指示滅菌時(shí)的溫度，對滅菌時(shí)間是否達到要求無(wú)法判斷。

四、生物指示劑法原理：

利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來(lái)測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個(gè)點(diǎn)：下層的前、中、后和上層、中層的中央點(diǎn)。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養2-7天，若培養基澄清、顏色沒(méi)有變化即說(shuō)明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養基黃色渾濁，說(shuō)明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。

目前實(shí)驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內的各個(gè)點(diǎn)上，高壓滅菌后，將管中盛培養液的玻璃管擠碎，培養液從內部的小管中被放出，放入56℃培養箱中培養，同時(shí)做陽(yáng)性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內的芽孢復活后生長(cháng)會(huì )改變肉湯的顏色是肉湯變?yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長(cháng)，肉湯仍舊是原來(lái)的紫色。對于滅菌器的效果驗證，目前并沒(méi)有相關(guān)標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實(shí)驗室應當自行制定驗證頻次規定，并嚴格按照要求進(jìn)行。從操作性和驗證結論兩個(gè)方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡(jiǎn)單，可以對滅菌效果進(jìn)行全面的驗證。

附：滅菌時(shí)的注意事項（一些進(jìn)口的全自動(dòng)滅菌鍋可不用考慮排氣）

使用高壓蒸氣滅菌器時(shí)，首先應注意在開(kāi)放蒸氣的同時(shí)，排除滅菌器內的冷空氣。必須將器內冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內仍存留有部分空氣時(shí)，則壓力表上雖已達到了某一壓力值，但器內之溫度仍未達到相應之度數。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內溫度不足，滅菌效果會(huì )受到影響。